Возможно, вы сменили регион при заполнении корзины.
Часть товаров из корзины будет перемещена в статус отложенных
и не сможет быть оформлена для заказа, если вы продолжите работу в данном регионе
На главную / Новости / Реактивы для генной инженерии и молекулярной биологии ИПТГ и X-Gal – лучший выбор!
Реактивы для генной инженерии и молекулярной биологии ИПТГ и X-Gal – лучший выбор!
03.11.2023
Компания Диаэм предлагает реактивы для генной инженерии и молекулярной биологии, в том числе индуктор lac-оперона ИПТГ и хромогенный субстрат X-Gal, используемые для проведения бело-голубого скрининга. Метод бело-голубой селекции – это колориметрическая система отбора рекомбинантных клонов, которая основана на изменении цвета бактериальных колоний в зависимости от наличия или отсутствия генно-инженерной вставки в плазмиде. Это простой и эффективный метод выявления рекомбинантных бактерий в экспериментах по клонированию.
Центральное место в этой технике занимает активность β-галактозидазы, фермента, кодируемого геном lacZ у E. coli, который метаболизирует лактозу с образованием глюкозы и галактозы. В активном состоянии он существует в виде тетрамера. Присутствие лактозы в окружающей среде запускает оперон lacZ в E. coli, что приводит к продукции фермента β-галактозидазы. Большинство плазмидных векторов несут короткий сегмент гена lacZα, который кодирует α-пептид, неактивный сегмент β-галактозидазы. Используемые в клонировании штаммы E. coli представляют собой компетентные клетки, содержащие делеционную мутацию lacZΔM15 и продуцирующие мутантную форму β-галактозидазы , неспособную образовывать тетрамер. Однако, в присутствии α-пептида эта мутантная форма белка может полностью вернуться в свое активное тетрамерное состояние. Восстановление функции мутантной β-галактозидазы с помощью α-пептида называется α-комплементацией.
Альтернативно, β-галактозидаза может гидролизовать другой субстрат, X-Gal, в результате чего образуется производное индиго синего цвета. X-gal, или 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-D-галактопиранозид — хромогенный субстрат для β-галактозидазы, образующий при гидролизе темно-синий продукт.
Процесс α-комплементации используется в качестве маркера рекомбинации. Клонирование чужеродного гена в вектор происходит внутрь гена β-галактозидазы (lacZ) в области MCS (мультиклональный сайт, полилинкер) (рис.1). В результате этого происходит разрыв кодирующей части гена lacZ и инактивация β-галактозидазы.
Для скрининга клонов, содержащих рекомбинантную ДНК, в чашку с агаром добавляют X-gal. Если образуется β-галактозидаза, X-gal гидролизуется с образованием нерастворимого синего пигмента. Поэтому колонии синего цвета образованы клетками, не содержащими вставку. Колонии, несущие рекомбинантную плазмидную ДНК, выглядят белыми из-за нарушения гена lacZ. Для проведения бело-голубого скрининга после трансформации вместе с X-Gal добавляют Изопропил-β-D-тиогалактопиранозид, или ИПТГ, который служит индуктором экспрессии гена lacZ ω.
Рис.1. Схематическое изображение бело-голубого скрининга.
1 – Рестрикция;
2 – лигирование;
3 - трансформация;
4 - скрининг на среде, содержащей X-gal и ИПТГ.
ИПТГ (Изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозид) - высокостабильный аналог лактозы. Он инактивирует lac-репрессор и индуцирует синтез бета-галактозидазы, фермента, метаболизирующего лактозу. Используется как индуктор экспрессии генов, клонированных под контроль lac-оперона.
Также используется совместно с X-Gal для бело-голубой селекции клонов.
Рекомендуется приготовление стокового раствора в концентрации 100 мМ. Для бело-голубой селекции используется конечная концентрация 0.1 мМ.
X-gal, или 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-D-галактопиранозид — хромогенный субстрат для фермента бета-галактозидазы. При расщеплении бета-галактозидазой от субстрата отщепляется индольная структура, которая спонтанно окисляется и выпадает в виде осадка синего цвета. Это свойство широко используется в молекулярной и клеточной биологии.
В первую очередь, X-gal применяется для анализа активности репортерного гена lacZ, кодирующего бета-галактозидазу, в клетках бактерий, дрожжей и животных. В растениях в качестве репортерного гена, маркером активности которого также является X-gal, используется ген GUS.
Также X-gal используется совместно с конъюгатами гликозидаз в качестве
реагента для вторичной детекции при иммуногистохимии и ELISA.
Наконец, поскольку бета-галактозидаза сохраняет свою активность в фиксированных клетках и тканях, X-gal используется для детекции её активности.
X-gal, или 5-бром-4-хлор-3-индолил-бета-D-галактопиранозид — хромогенный субстрат для фермента бета-галактозидазы, при расщеплении которого бета-галактозидазой от субстрата отщепляется индольная структура, которая спонтанно окисляется и выпадает в виде осадка синего цвета. Это свойство широко используется в клеточной и молекулярной биологии.
В основном X-gal применяется для анализа активности репортерного гена lacZ, кодирующего бета-галактозидазу в клетках бактерий, дрожжей и животных. В растениях в качестве репортерного гена используется ген GUS, маркером активности которого также является X-gal.
X-gal используется также совместно с конъюгатами гликозидаз в качестве
реагента для вторичной детекции при иммуногистохимии и ELISA.
Так как бета-галактозидаза сохраняет свою активность в фиксированных клетках и тканях, X-gal используется для детекции её активности.
Стерильная вода, обработанная диэтилпирокарбонатом (ДЭПК), свободная от РНКаз и ДНКаз, предназначена для работы c ДНК и РНК, приготовления растворов для молекулярно-биологических работ, проведения различных молекулярно-биологических реакций.
T4 ДНК лигаза катализирует образование фосфодиэфирной связи между 5`-фосфатной и 3`-гидроксильными концевыми группами ДНК или РНК, выделена из штамма E.coli, несущего клонированный ген ДНК-лигазы из фага T4. Необходим АТФ в качестве кофактора.
Применение T4 ДНК лигазы
Клонирование ДНК;
лигирование «тупых» и «липких» концов ДНК;
присоединение линкеров или адаптеров к двуцепочечной ДНК;
восстановление одноцепочечных разрывов в двуцепочечной ДНК, РНК или гибридах ДНК/РНК;
лигазная детекция;
сайт-направленный мутагенез.
Комплект поставки:
T4 лигаза; 10х буфер для проведения реакции.
Taq ДНК-лигаза катализирует образование фосфодиэфирной связи между совмещенными 5 ́ фосфатом и 3 ́ гидроксильными концами двух соседних нуклеотидов в контексте двухцепочечной молекулы ДНК. Лигирование будет происходить только в том случае, если смежные нуклеотиды идеально спарены и не имеют зазоров между ними, что позволяет использовать этот фермент в качестве инструмента для обнаружения замещений с одним основанием. Taq ДНК-лигаза использует NAD + в качестве кофактора.
Особенности Taq ДНК-лигазы
Термостабильность – проявляет максимальную активность при 45-70 °С;
Т4 ДНК-лигаза FastLink в высокой концентрации предназначен для быстрого лигирования тупых и липких концов фрагментов ДНК в течение 5 минут при 25 °С. Набор может использоваться при клонировании ДНК (в частности T/A клонирование), создании библиотек и лигировании линкеров.
Комплект поставки:Т4 ДНК-лигаза FastLink, 2х буфер для лигирования.
Фрагмент Кленова представляет собой большой фрагмент ДНК-полимеразы I E.coli, выделен из штамма E.coli, содержащего ген ДНК-полимеразы I, обладает 5' → 3' полимеразной активностью и 3' → 5' экзонуклеазной (корректирующей) активностью, но не обладает 5' → 3' экзонуклеазной активностью ДНК-полимеразы I.
Особенности Фрагмента Кленова
Включает модифицированные нуклеотиды, такие как Cy3-, Cy5-, аминоаллил-, биотин-, дигоксигенин- и флуоресцентно-меченные нуклеотиды, в последовательность ДНК;
обладает 5' → 3' полимеразной активностью;
обладает 3' → 5' экзонуклеазной (корректирующей) активностью;
не обладает 5' →3' экзонуклеазной активностью ДНК-полимеразы I;
совместим с большинством реакционных буферных растворов.
Применение Фрагмента Кленова
Введение меток различной природы в последовательность ДНК;
введение меток в случайные праймеры;
удаление 3'-выступающих концов или достраивания 5'-недостающих концов ДНК;
синтез комплементарной цепи по матрице кДНК;
сайт-специфический мутагенез с синтетическими олигонукллеотидами;
секвенирование по Сэнгеру.
Комплект поставки:
фрагмент Кленова; 10х буфер для проведения реакции.
Фрагмент Кленова (3'→5' exo-) представляет собой большой фрагмент ДНК-полимеразы I E.coli (фрагмент Кленова), выделен из штамма E.coli, содержащего ген ДНК-полимеразы I E.coli (Фрагмент Кленова), фермент сохраняет 5' → 3' полимеразную активность, но не обладает как 5' → 3', так и 3' → 5' экзонуклеазной активностью ДНК-полимеразы I.
Особенности Фрагмента Кленова (3'→5' exo-)
Обладает 5' → 3 'полимеразной активностью;
не обладает 5' → 3' экзонуклеазной активностью;
не обладает 3' → 5' экзонуклеазной активностью;
включает модифицированные нуклеотиды, такие как Cy3-, Cy5-, аминоаллил-, биотин-, дигоксигенин- и флуоресцентно-меченные нуклеотиды в последовательность ДНК;
совместим с большинством реакционных буферных растворов.
Области применения Фрагмента Кленова (3'→5' exo-)
Синтез комплементарной цепи по матрице кДНК;
сайт-направленный мутагенез с использованием специфических праймеров;
введение меток различной природы в последовательность ДНК;
введение меток в случайные праймеры;
секвенирование ДНК методом Сэнгера;
создание библиотек для NGS.
Комплект поставки: фрагмент Кленова (3'→5' exo-); 10х буфер для проведения реакции.
Агар LB по Lennox богат питательными веществами и применяется для поддержания культуры E.coli.
Триптон обеспечивает азотом, витаминами, минералами и аминокислотами, необходимыми для роста E.coli; дрожжевой экстракт является источником витаминов, особенно В-группы; натрий хлорид поддерживает необходимый осмос; бактериологический агар является желирующим агентом.
Триптон, г/л
10,0
Дрожжевой экстракт, г/л
5,0
Натрий хлорид, г/л
5,0
Бактериологический агар
15,0
рН
7,0±0,2
Растворите 35 г в 1 л дистиллированной воды, нагрейте до полного растворения, стерилизуйте в автоклаве 15 мин при 121 °C, храните при 8-15 °C.
Агар LB по Lennox богат питательными веществами и применяется для поддержания культуры E.coli.
Триптон обеспечивает азотом, витаминами, минералами и аминокислотами, необходимыми для роста E.coli; дрожжевой экстракт является источником витаминов, особенно В-группы; натрий хлорид поддерживает необходимый осмос; бактериологический агар является желирующим агентом.
Агар LB по Lennox с ампициллином используется для отбора рекомбинантных штаммов E.coli по устойчивости к ампициллину.
Триптон, г/л
10,0
Дрожжевой экстракт, г/л
5,0
Натрий хлорид, г/л
5,0
Бактериологический агар, г/л
15,0
Ампициллин, г/л
0,10
рН
7,0±0,2
Растворите 35 г в 1 л дистиллированной воды, нагрейте до полного растворения, не перегревайте (ампициллин при нагревании разрушается), не стерилизуйте в автоклаве, храните при 8-15 °C.
Агар LB по Lennox богат питательными веществами и применяется для поддержания культуры E.coli.
Триптон обеспечивает азотом, витаминами, минералами и аминокислотами, необходимыми для роста E.coli; дрожжевой экстракт является источником витаминов, особенно В-группы; натрий хлорид поддерживает необходимый осмос; бактериологический агар является желирующим агентом.
Агар LB по Lennox с канамицином используется для отбора рекомбинантных штаммов E.coli по устойчивости к канамицину.
Триптон, г/л
10,0
Дрожжевой экстракт, г/л
5,0
Натрий хлорид, г/л
5,0
Бактериологический агар, г/л
15,0
Канамицин, г/л
0,05
рН
7,0±0,2
Растворите 35 г в 1 л дистиллированной воды, нагрейте до полного растворения, стерилизуйте в автоклаве 10 мин при 118 °C, храните при 8-15 °C.
Агар LB по Miller богат питательными веществами и применяется для поддержания культуры E. coli. Повышенное содержание натрий хлорида.
Триптон обеспечивает азотом, витаминами, минералами и аминокислотами, необходимыми для роста E. coli; дрожжевой экстракт является источником витаминов, особенно В-группы; натрий хлорид поддерживает необходимый осмос; бактериологический агар является желирующим агентом.
Триптон, г/л
10,0
Дрожжевой экстракт, г/л
5,0
Натрий хлорид, г/л
10,0
Бактериологический агар, г/л
15,0
рН
7,0±0,2
Приготовление: растворите 40 г в 1 л дистиллированной воды, нагрейте до полного растворения, стерилизуйте в автоклаве 15 мин при 121 °C, храните при 8-15 °C.
Агар LB по Miller богат питательными веществами и применяется для поддержания культуры E. coli. Повышенное содержание натрий хлорида.
Триптон обеспечивает азотом, витаминами, минералами и аминокислотами, необходимыми для роста E. coli; дрожжевой экстракт является источником витаминов, особенно В-группы; натрий хлорид поддерживает необходимый осмос. Бактериологический агар является желирующим агентом.
Агар LB по Miller с ампициллином используется для отбора рекомбинантных штаммов E. coli по устойчивости к ампициллину.
Триптон, г/л
10,0
Дрожжевой экстракт, г/л
5,0
Натрий хлорид, г/л
10,0
Бактериологический агар, г/л
15,0
Ампициллин, г/л
0,05
рН
7,0±0,2
Приготовление: растворите 40 г в 1 л дистиллированной воды, нагрейте до полного растворения, не перегревайте (ампициллин при нагревании разрушается), не стерилизуйте в автоклаве, храните при 8-15 °C.
Агар LB по Miller богат питательными веществами и применяется для поддержания культуры E. coli. Повышенное содержание натрий хлорида.
Триптон обеспечивает азотом, витаминами, минералами и аминокислотами, необходимыми для роста E. coli; дрожжевой экстракт является источником витаминов, особенно В-группы; натрий хлорид поддерживает необходимый осмос; бактериологический агар является желирующим агентом.
Агар LB по Miller с канамицином используется для отбора рекомбинантных штаммов E. coli по устойчивости к канамицину.
Триптон, г/л
10,0
Дрожжевой экстракт, г/л
5,0
Натрий хлорид, г/л
10,0
Бактериологический агар, г/л
15,0
Канамицин, г/л
0,05
рН
7,0±0,2
Растворите 40 г в 1 л дистиллированной воды, нагрейте до полного растворения, нагрейте до полного растворения, стерилизуйте в автоклаве 10 мин при 118 °C, храните при 8-15 °C.
Агар LB по Miller богат питательными веществами и применяется для поддержания культуры E. coli. Повышенное содержание натрий хлорида.
Триптон обеспечивает азотом, витаминами, минералами и аминокислотами, необходимыми для роста E. coli; дрожжевой экстракт является источником витаминов, особенно В-группы. Натрий хлорид поддерживает необходимый осмос. Бактериологический агар является желирующим агентом.
Агар LB по Miller с хлорамфениколом используется для отбора рекомбинантных штаммов E. coli по устойчивости к хлорамфениколу.
Триптон, г/л
10,0
Дрожжевой экстракт, г/л
5,0
Натрий хлорид, г/л
10,0
Бактериологический агар, г/л
15,0
Хлорамфеникол, г/л
0,034
рН
7,0±0,2
Растворите 40 г в 1 л дистиллированной воды, нагрейте до полного растворения, стерилизуйте в автоклаве 10 мин при 118 °C, храните при 8-15 °C.
Среда SOC богата питательными веществами и применяется для приготовления и трансформации компетентных клеток.
Триптон обеспечивает азотом, витаминами, минералами и аминокислотами, необходимыми для роста E. coli; дрожжевой экстракт является источником витаминов, особенно В-группы; натрий и калий хлорид поддерживает необходимый осмос; глюкоза поставляет необходимый энергетический ресурс для восстановления клеток после трансформации и для репликации.
Триптон, г/л
20,0
Дрожжевой экстракт, г/л
5,0
Натрий хлорид, г/л
0,5
Калий хлорид, г/л
0,186
Хлорид магния, г/л
0,96
Глюкоза, г/л
3,6
рН
7,0±0,2
Растворите 30,2 г в 1 л дистиллированной воды, нагрейте до полного растворения, стерилизуйте в автоклаве 15 мин при 121 °C, храните при 2-8 °C.
Набор для клонирования ПЦР-продуктов FastCLone представляет собой усовершенствованную систему положительной селекции для высокоэффективного клонирования ПЦР-продуктов, полученных с помощью любой термостабильной ДНК-полимеразы. С помощью набора FastCLone может быть клонирован любой ДНК-фрагмент имеющий как тупые так и липкие концы. FastCLone идеально подходит для клонирования фосфорилированных или нефосфорилированных фрагментов ДНК. В комплект набора входит вектор содержащий летальный ген, который разрушается лигированием вставки ДНК в сайт клонирования. В результате только бактериальные клетки содержащие рекомбинантные плазмиды способны образовывать колонии. Такой положительный отбор ускоряет процесс скрининга колоний и устраняет дополнительные затраты, необходимые для проведения бело-голубой селекции.
Применение набора для клонирования ПЦР-продуктов FastCLone:
клонирование ПЦР-продуктов с тупыми или липкими концами;
клонирование фрагментов ДНК, полученных после гидролиза эндонуклеазами рестрикции;
транскрипция in vitro и in vivo клонированных вставок промотора Т7.
Условия хранения: -20 °С.
Реактивы и наборы для выделения, очистки, элюции, наборы и экстра миксы для ПЦР
Набор реактивов для ПЦР с Taq-ДНК-полимеразой Hot Start содержит рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу и растворы всех необходимых компонентов для проведения стандартной ПЦР c "горячим" стартом (за исключением матрицы ДНК и праймеров). В состав набора входят: раствор HS-Taq ДНК-полимеразы (5 ед. акт./мкл), 5× ПЦР буфер, 50 мМ MgCl2, 50× смесь dNTP и 6× буфер для нанесения на гель. Все реагенты высокого качества и оптимизированы для проведения ПЦР.
HS-Taq ДНК-полимераза представляет собой рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами. HS-Taq ДНК-полимераза неактивна при температуре до +70 °С. Это позволяет избежать образования неспецифических продуктов и праймер-димеров при низкой температуре на стадии смешивания компонентов ПЦР-смеси. Активация осуществляется на первом цикле ПЦР путём 5-минутной инкубации при +95 °С. Рекомбинантная Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5´-3´ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н. и обладает способностью присоединять адениновый остаток к 3’-концу синтезируемой цепи ДНК, поэтому ПЦР-фрагменты пригодны для ТА-клонирования.
5× ПЦР-буфер оптимизирован для проведения эффективной и воспроизводимой ПЦР (не содержит MgCl2). В состав буфера входят добавки, повышающие время полужизни и процессивность HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР. Буфер химически стабилен, инертен и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристики плавления матрицы. Входящие в набор 50 мМ раствор MgCl2
и 50× смесь dNTP позволяют легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему «матрица-праймеры», а 6× Буфер для нанесения на гель облегчает пробоподготовку для электрофореза ПЦР-продуктов и контроль над ходом электрофореза.
Состав набора
Кат. #
HS-Taq ДНК-полимераза, 5 ед. акт./мкл*
5× ПЦР-буфер
50 мМ MgCl2
50× смесь dNTP (10 мМ каждого)
6× буфер для нанесения на гель
Кол-во, ед. акт.
1957.0500
1 × 100 мкл
2 × 1,5 мл
1 × 1 мл
2 × 200 мкл
1 × 1,75 мл
500
1957.2250
3 × 150 мкл
8 × 1,5 мл
2 × 1 мл
4 × 400 мкл
3 × 1.75 мл
2250
* За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 10 нмоль dNTP в кислотонерастворимый продукт за 30 мин при 74 °С.Условия реакции:50 мМ Трис-HCl, pH 9.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 10 мМ MgCl2, 200 мM dATP, 200 мM dCTP, 200 мM dGTP, 50 мM [3H] dTTP, 0.25 мг/мл активированной ДНК из тимуса теленка.
Буфер для хранения HS-Taq ДНК-полимеразы:
50 мМ Трис-HCl, pH 8.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 0,1 мМ ЭДТА, 1мМ дитиотреитол, 50% (v/v) глицерин и 1% (v/v) Тритон Х-100.
Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 т.п.н.
Ингибирование и инактивация
Ингибиторы: ионные детергенты (дезоксихолат натрия, саркозил и додецилсульфат натрия (SDS) в концентрациях выше, чем 0,06, 0,02 и 0,01%, соответственно).
Инактивируется экстракцией смесью фенол/хлороформ.
Хранение и транспортировка: при -20°С; не более 50 циклов замораживания-размораживания.
Срок хранения: при соблюдении условий хранения и транспортировки 1 год.
Применение: получение длинных фрагментов до 25 000 п.н., получение продуктов для ТА-клонирования, амплификация GC-богатых и сложных матриц. Из-за содержания инертного красителя смесь не рекомендуется использовать для ПЦР в реальном времени и других приложений, требующих измерения флуоресценции; для таких приложений необходимо использовать смесь qPCR (2х) и qPCR SYBR Blue (2х).
Набор реактивов для ПЦР с Taq-полимеразой Hot Start (+MgCl2) содержит рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу и растворы всех необходимых компонентов для проведения стандартной ПЦР c “горячим” стартом (за исключением матрицы ДНК и праймеров). ПЦР-буфер, входящий в состав набора, уже содержит MgCl2
в концентрации 10 мМ, достаточной для постановки большинства рутинных ПЦР.
HS-Taq ДНК-полимераза представляет собой рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами. HS-Taq ДНК-полимераза не активна при температуре до +70 °С. Это позволяет избежать образования неспецифических продуктов и праймер-димеров при низкой температуре на стадии смешивания компонентов ПЦР-смеси. Активация осуществляется на первом цикле ПЦР путём инкубации в течение 5 мин при +95 °С. Рекомбинантная Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; она обладает способностью присоединять адениновый остаток к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.
5× ПЦР-буфер (+MgCl2) оптимизирован для проведения эффективной и воспроизводимой ПЦР. В состав буфера входят MgCl2
(10 мМ) и добавки, повышающие время полужизни и процессивность HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР. Буфер химически стабилен, инертен и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристики плавления матрицы. Входящие в набор 50 мМ раствор MgCl2
и 50× смесь dNTP позволяют легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему «матрица-праймеры», а 6× Буфер для нанесения на гель облегчает пробоподготовку для электрофореза ПЦР-продуктов и контроль над ходом электрофореза.
Состав набора
Кат. #
HS-Taq DNA-полимераза, 5 ед. акт./мкл*
5× ПЦР буфер (+MgCl2)
50 мМ MgCl2
50× смесь dNTP (10 мМ каждого)
6×буфер для нанесения на гель
Кол-во, ед. акт.
1958.0500
1 × 100 мкл
2 × 1.5 мл
1 × 1 мл
2 × 200 мкл
1 × 1.5 мл
500
1958.2250
3 × 150 мкл
8 × 1.5 мл
2 × 1 мл
4 × 400 мкл
3 × 1.5 мл
2250
* За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 10 нмоль dNTP в кислотонерастворимый продукт за 30 мин при 74 °С. Условия реакции: 50 мМ Трис-HCl, pH 9.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 10 мМ MgCl2, 200 мM dATP, 200 мM dCTP, 200 мM dGTP, 50 мM [3H] dTTP, 0,25 мг/мл активированной ДНК из тимуса теленка.
Буфер для хранения HS-Taq ДНК-полимеразы:
50 мМ Трис-HCl, pH 8.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 0.1 мМ ЭДТА, 1мМ дитиотреитол, 50% (v/v) глицерин и 1% (v/v) Тритон Х-100.
Область применения:
ПЦР с “горячим” стартом.
Высокопроизводительная ПЦР.
Обычная ПЦР с высокой воспроизводимостью.
Наработка ПЦР-продуктов для ТА клонирования.
Вторая стадия ОТ-ПЦР.
Ограничения к использованию:
Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 тыс. п.н.
Ингибирование и инактивация
Ингибиторы: ионные детергенты (дезоксихолат натрия, саркозил и додецилсульфат натрия (SDS) в концентрациях выше, чем 0,06, 0,02 и 0,01%, соответственно).
Инактивируется экстракцией смесью фенол/хлороформ.
Хранение и транспортировка: при -20 °С; не более 50 циклов замораживания-размораживания.
Срок хранения: при соблюдении условий хранения и транспортировки 1 год.
Набор предназначен для выделения до 25 мкг плазмидной ДНК длиной до 20 т.п.н. из 3-5 мл бактериальной культуры. Очистка ДНК на колонках diaGene происходит за счёт избирательного связывания ДНК с сорбентом в присутствии хаотропной соли с последующей отмывкой связанной ДНК от примесей и заканчивается элюцией чистого препарата ДНК.
Выход ДНК зависит от ряда факторов: копийности плазмиды, условий роста, объёма культуры и т.д.
Не рекомендуется использовать для выделения плазмид длиной свыше 50 тысяч пар нуклеотидов, а также для получения препарата плазмидной ДНК для трансфекции эукариотических клеток.
Набор предназначен для выделения тотальной РНК из культуры животных клеток. Выделение РНК начинается с лизиса клеток, при этом ядра, содержащие геномную ДНК, остаются интактными. Очистка нуклеиновой кислоты происходит за счёт связывания РНК с сорбентом колонок diaGene. Связанная РНК отмывается от примесей и элюируется в виде чистого препарата. Выход РНК зависит от типа и количества клеток, поэтому надо учитывать, что ёмкость колонок — до 20 мкг.
Набор предназначен для элюции и очистки фрагментов ДНК из легкоплавкого агарозного геля после электрофоретического разделения. С помощью набора можно элюировать ДНК из ТАЕ- или ТВЕ-геля, процесс прост и занимает не более 15-20 минут. После отмывки от примесей чистый препарат ДНК элюируется с колонки.
Полученный препарат ДНК может использоваться для рестриктазного расщепления, лигирования, секвенирования и др.
Ёмкость колонки diaGene составляет до 25 мкг ДНК.
Буфер для сорбции М содержит в своем составе индикатор кислотности. Эффективность сорбции ДНК зависит от рН (связывание ДНК с сорбентом происходит при рН < 7,5). При оптимальном для сорбции рН индикатор имеет желтый цвет. Если после добавления к образцу
буфера М цвет индикатора отличается от желтого, к смеси необходимо добавить 10 мкл 3М ацетата Na (pH 5,0).
Реагент RiZol для выделения суммарной РНК из различных биологических образцов — это готовый к использованию реагент для выделения высококачественной суммарной РНК из образцов человеческого, животного, растительного, дрожжевого, бактериального и вирусного происхождения. Под действием реагента RiZol происходит гомогенизация биологического образца и лизис клеток, не нарушая целостность РНК за счет ингибирования действия РНКаз. Процедура выделения РНК занимает не более часа. Выделение ДНК и белков с использованием реагента RiZol — менее трех часов. Выделенная РНК может быть использована для синтеза кДНК, ОT-ПЦР, трансляции in vitro и др.
Особенности реагента RiZol
Реагент RiZolимеет следующие особенности:
время выделения РНК — 1 час;
время выделение ДНК — 3 часа;
полученная РНК может быть использована после выделения для ПЦР; молекулярного клонирования, блоттинга, конструирования библиотек кДНК;
дополнительная очистка полученной РНК после выделения не требуется.
Условия хранения и перевозки: при 20 °С в темном месте.
Обратная транскриптаза HiScript II — это новое поколение обратной транскриптазы вируса мышиного лейкоза Молони (обратная транскриптаза M-MLV (RNase H-)). По сравнению с обратными транскриптазами предыдущего поколения, термостабильность данного продукта значительно улучшена. Время полужизни при 50 °С превышает 240 минут. При 55 °С фермент также может быть стабильным в течение длительного времени, что значительно улучшает транскрипцию РНК-матриц со сложной вторичной структурой. Кроме того, фермент обладает улучшенным сродством к матрице и повышенной эффективностью синтеза кДНК. Обратная транскриптаза HiScript II обладает хорошей устойчивостью к большинству ингибиторов ОТ-ПЦР, и пригодна для амплификации длинных фрагментов кДНК длиной до 20 тыс. п.н.
Комплект поставки:
Компонент
R201-01, 2000 ед. акт.
R201-02, 10000 ед. акт.
Буфер 5×HiScript II
500 мкл
500 мкл
Обратная транскриптаза HiScript II (200 ед/мкл)
10 мкл
50 мкл
За единицу активности принимается количество фермента, катализирующее включение 1 нмоль dTТP в кислотонерастворимый продукт за 10 мин при +37 °С с использованием Poly(rA)-Oligo(dT) в качестве матрицы/праймера.
Обратная транскриптаза HiScript III Reverse Transcriptase — это улучшенная версия обратной транскриптазы HiScript II, предназначенная для проведения эффективной реакции обратной транскрипции при 37 °С. Данная транскриптаза обладает высокой термостабильностью своего предшественника HiScript II обратной транскриптазы. При проведении реакции обратной транскрипции по матрице РНК имеющей сложную вторичную структуру, температура реакции может быть повышена до 50 ~ 55 °С, без возникновения ингибирующего эффекта на синтез кДНК. Кроме того, данный продукт также обладает превосходной способностью к длительному синтезу и повышенной устойчивостью к инигбиторам.
Комплект поставки:
Компонент
R302-01, 10000 ед. акт.
Буфер 5×HiScript III
500 мкл
Обратная транскриптаза HiScript III (200 ед/мкл)
50 мкл
За единицу активности принимается количество фермента, катализирующее включение 1 нмоль dTТP в кислотонерастворимый продукт за 10 мин при +37 °С с использованием Poly(rA)-Oligo(dT) в качестве матрицы/праймера.
Обратная транскриптаза M-MLV (H-) представляет собой мутантную версию обратной транскриптазы дикого типа с отсутствующей активностью РНКазы H, полученную путем целенаправленной мутации. По сравнению с обычными мутантами, полученными методом удаления домена РНКазы Н, этот продукт сохраняет полную структуру белка и, следовательно, обладает той же полимеразной активностью, что и дикий тип. Его можно использовать для синтеза более длинных фрагментов кДНК и создания полноразмерных библиотек кДНК.
Преимущества обратной транскриптазы M-MLV (H-)
Не обладает активностью РНКазы Н;
синтез фрагментов кДНК длиной до 3 кб;
стабильная и надежная производительность обратной транскрипции для образцов РНК с концентрацией выше 100 нг;
может использоваться для экспериментов, таких как RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends), построения библиотеки кДНК.
Транскриптаза обратная Smart RT проявляет максимальную активность при температуре 35-42 °С, катализирует матричный синтез ДНК используя в качестве матрицы РНК, при этом не обладает активностью РНКазы Н и 3' → 5' экзонуклеазной активностью. Для проведения реакции необходимо наличие random-праймера.
Особенности Транскриптазы обратной Smart RT
Оптимальная температура, °С - 35-42;
отсутствие активности РНКазы Н;
отсутствие 3' → 5' экзонуклеазной активности.
Области применения транскриптазы обратной Smart RT
Синтез кДНК по матрице РНК;
ОТ-ПЦР;
мультиплексная ОТ-ПЦР с детекцией в режиме реального времени.
Комплект поставки:
транскриптаза обратная Smart RT, 10х буфер для проведения реакции, 100 мМ DTT.
Транскриптаза обратная Super RT обладает повышенной термической стабильностью и проявляет максимальную активность в широком диапазоне температур от 25 до 70 °С, катализирует матричный синтез ДНК по матрице РНК, при этом не обладает активностью РНКазы Н и 3' → 5' экзонуклеазной активностью. Благодаря повышенной термостабильности Транскриптаза обратная Super RT позволяет проводить реакцию обратной транскрипции при повышенных температурах и использовать в качестве матрицы РНК со сложной вторичной структурой
Особенности Транскриптазы обратной Super RT
Широкий диапазон температур активности – от 25 до 70 °С
проведение обратной транскрипции по матрице РНК имеющей сложную вторичную структуру;
отсутствие активности РНКазы Н;
отсутствие 3' → 5' экзонуклеазной активности.
Области применения транскриптазы обратной Super RT
Обратная транскрипция;
ОТ-ПЦР;
мультиплексная ОТ-ПЦР с детекцией в режиме реального времени.
Комплект поставки:
транскриптаза обратная Super RT, 10х буфер для проведения реакции, 100 мМ DTT.
Транскриптаза обратная термостабильная Smart RTT проявляет максимальную активность при температуре 55 °С, катализирует матричный синтез ДНК используя в качестве матрицы РНК, при этом не обладает активностью РНКазы Н и 3' → 5' экзонуклеазной активностью. Для проведения реакции необходимо наличие random-праймера
Особенности транскриптазы обратной термостабильной Smart RTT
Оптимальная температура, °С – 55;
проведение обратной транскрипции с образцов РНК со сложной вторичной структурой;
отсутствие активности РНКазы Н;
отсутствие 3' → 5' экзонуклеазной активности.
Области применения транскриптазы обратной термостабильной Smart RTT
Обратная транскрипция;
ОТ-ПЦР;
мультиплексная ОТ-ПЦР с детекцией в режиме реального времени.
Комплект поставки:
транскриптаза обратная термостабильная Smart RTT, 10х буфер для проведения реакции, 100 мМ DTT.
Горелка Бунзена газовая DIN 30665 для природного газа — № 7000:
Регулировка воздуха;
материал – латунь никелированная;
максимальная температура в центре пламени, °С — 1300;
мощность, Вт — 1530;
давление, мбар — 23;
расход газа, г/ч — 120;
габариты, мм — 76 х 180.
Горелки Бунзена, Теклю и Мекера предназначены для работы как с природным газом (метан), так и со сжиженным газом
(пропан, бутан).
Горелки Бунзена и Теклю применяются в тех случаях, когда необходимо узкое и высокое пламя: для нагрева
небольших сосудов, колб, пробирок и т.п. изделий, а также материалов, соизмеримых с размерами факела. Недостаток
горелок Теклю и Бунзена — проскоки пламени.
Горелка Мекера создает равномерное пламя с постоянной интенсивностью
нагрева и не имеет проскока пламени. Перфорированная решетка в верхней части горелки создает большое по площади
пламя с высокой температурой, состоящее из множества отдельных факелов. Горелки Мекера применяются в случаях, когда
необходимо широкое по размерам пламя с высокой температурой, например, для плавки, сплавливания и прокаливания
различных веществ, а также нагрева жидких реагентов.
Для плавного регулирования тепловой мощности (потока газа) в
конструкции горелок предусмотрен либо игольчатый, либо откидной клапан.
Горелка Бунзена газовая DIN 30665 для пропана/бутана — № 7000:
Регулировка воздуха;
материал – латунь никелированная;
максимальная температура в центре пламени, °С — 1300;
мощность, Вт — 2360;
давление, мбар — 60;
расход газа, г/ч — 180;
габариты, мм — 76 х 180.
Горелки Бунзена, Теклю и Мекера предназначены для работы как с природным газом (метан), так и со сжиженным газом
(пропан, бутан).
Горелки Бунзена и Теклю применяются в тех случаях, когда необходимо узкое и высокое пламя: для нагрева
небольших сосудов, колб, пробирок и т.п. изделий, а также материалов, соизмеримых с размерами факела. Недостаток
горелок Теклю и Бунзена — проскоки пламени.
Горелка Мекера создает равномерное пламя с постоянной интенсивностью
нагрева и не имеет проскока пламени. Перфорированная решетка в верхней части горелки создает большое по площади
пламя с высокой температурой, состоящее из множества отдельных факелов. Горелки Мекера применяются в случаях, когда
необходимо широкое по размерам пламя с высокой температурой, например, для плавки, сплавливания и прокаливания
различных веществ, а также нагрева жидких реагентов.
Для плавного регулирования тепловой мощности (потока газа) в
конструкции горелок предусмотрен либо игольчатый, либо откидной клапан.
Регистрация на сайте компании Диаэм доступна только для юридических лиц, для физических лиц сделать заказ и узнать его статус можно без регистрации или обратившись в компанию по телефону +7 495-745-0508 или электронной почте info@dia-m.ru
Для повышения удобства работы с сайтом на нем используются файлы cookie.
В cookie содержатся данные о Ваших прошлых посещениях сайта. Если Вы не хотите, чтобы эти данные
обрабатывались, отключите cookie в настройках браузера.
