DAPI — краситель, связывающийся с участками ДНК, обильными азотистыми основаниями А-Т. DAPI используется для хромосомных окрашиваний, в проточной цитофлуориметрии, а также для маркировки ядер в микроскопии с флуоресценцией.

DAPI широко используется для равномерного окрашивания фиксированных клеткок. DAPI не перемещается сквозь клеточные мембраны в низких и нормальных концентрациях, в противном случае может окрасить и живые клетки.

При взаимодействии с РНК флуоресценция будет очень слабая.

Продукт поставляется в виде сухого желтого вещества в герметичной пробирке. При соблюдении условий хранения (защищенное от света место и температура -20 °C) краситель имеет срок хранения 24 месяца или 2 года.

DAPI (4′,6-диамидино-2-фенилиндол) — это синий флуоресцентный краситель ДНК, который усиливает флуоресценцию примерно в 20 раз при реагировании с AT-областями dsDNA. Он возбуждается фиолетовой (405 нм) лазерной линией и обычно используется в качестве ядерного контрокрасителя в окрашвании хромосом, флуоресцентной микроскопии, проточной цитометрии.

Спектральные свойства DAPI превращают его в идеальный при использовании с зелеными (Invitrogen Alexa Fluor 488, FITC, GFP) и красными (Invitrogen Alexa Fluor 594, родамин, Invitrogen Texas Red, mCherry, mKate-2) флуорофорами в многоцветных экспериментах.

Как часто используемый вспомогательный липид, DOPE демонстрирует сильные синергические эффекты при изготовлении катионных липосом. Липосомы, созданные с DOPE, были разработаны в виде коммерческих трансфекционных реагентов и широко используются в фундаментальных исследованиях. Кроме того, ДОФЭ также является важным вспомогательным липидом в составах катионных липидов и продаваемых липосомальных вакцинах, таких как Эпаксал и Инфлексал V.

• Регистрационный номер NMPA CDE: /USFDA.
• DMF №: 028884.

Это жидкая среда для фиксации на основе глицерина, разработанная для обеспечения защиты от выцветания флуоресценции во всем видимом и ИК-спектре. Можно использовать практически с любым флуоресцентным красителем или флуоресцентным белком (например, GFP, RFP, mCherry) для достижения яркого сигнала и низкого фона. ProLong Diamond Mountant с DAPI лучше всего использовать для сохранения силы сигнала в течение длительных сеансов визуализации флуоресцентных красителей или флуоресцентных белков во время конфокального лазерного сканирования или микроскопии сверхвысокого разрешения.

При связывании с ДНК DAPI можно обнаружить с помощью традиционного фильтра DAPI под УФ-светом с возбуждением 360 нм и испусканием 460 нм. ProLong Diamond Mountant с DAPI образует оптический путь с показателем преломления (RI) 1,47 при отверждении и обеспечивает более длительное хранение образцов, защищая их от фотообесцвечивания.

ProLong Diamond Mountant с DAPI не обесцвечивается и не сжимается при отверждении. Включение DAPI в формулу среды для заливки Prolong Diamond помогает сохранить ядерное окрашивание для длительного хранения по сравнению с последовательным окрашиванием/заливкой в ​​базовую среду для заливки.

Поставляется готовым к использованию во флаконе-капельнице объемом 2 мл.

Нанесите каплю на образец, накройте покровным стеклом, дайте зафиксироваться и сделайте снимок. Перед добавлением монтирующей среды удалите излишки влаги со слайда, постукивая по боковой стороне слайда или покровного стекла чистой лабораторной салфеткой.

Зафиксируйте образец после добавления монтирующей среды:

• поместите монтируемый образец на ровную сухую поверхность;
• инкубируйте в течение 24 часов при комнатной температуре в темноте.

Плотно закрывайте крышку между использованиями, чтобы предотвратить испарение и затвердевание монтирующей среды во флаконе, и храните в соответствии с рекомендациями на упаковке.

LumiMount DAPI — это готовая к использованию фиксирующая среда на водной основе, содержащая ядерный краситель DAPI (4’,6-диамидино-2-фенилиндол). Она предназначена для одновременного окрашивания клеточных ядер и герметизации флуоресцентно меченых цитологических или гистологических препаратов. DAPI избирательно связывается с AT-богатыми участками двухцепочечной ДНК, вызывая более чем 20-кратное усиление синей флуоресценции. Максимумы спектра: поглощение — 358 нм, эмиссия — 461 нм.

Характеристики среды

• Объём, мл — 15;
• основа — водная;
• содержит DAPI — да;
• коэффициент преломления (жидкая фаза) — 1,38;
• коэффициент преломления (после частичного высыхания) — до 1,46;
• тип герметизации — полупостоянная;
• условия хранения препарата после монтирования, °С — от +2 до +8;
• совместимость — совместима с большинством стандартных флуорохромов;
• дополнительно — рекомендуется герметизация краёв покровного стекла лаком.

В традиционных протоколах окрашивание ядер и монтирование выполняются раздельно, что увеличивает время подготовки образца и риск повреждения сигнала. Кроме того, без специальных стабилизирующих добавок флуорохромы быстро теряют яркость под микроскопом. Данная среда решает обе задачи за один шаг: обеспечивает чёткую визуализацию ядер и защищает весь флуоресцентный сигнал от фотобелинга благодаря встроенным антифейд-компонентам.

После нанесения среда постепенно концентрируется под покровным стеклом за счёт испарения воды, что приводит к увеличению коэффициента преломления до 1,46 — значения, близкого к оптическим характеристикам стекла. Это улучшает качество изображения при микроскопии. Герметизация считается полупостоянной: препараты можно хранить при +2…+8 °С в темноте в течение нескольких недель. При необходимости покровное стекло легко удаляется путём инкубации слайда в PBS-буфере до полного растворения среды.

Для максимальной долговечности образца рекомендуется дополнительно герметизировать края покровного стекла водонепроницаемым лаком — это предотвратит высыхание и проникновение влаги. Среда совместима с большинством распространённых флуоресцентных меток (FITC, TRITC, Cy3, Alexa Fluor и др.), что делает её универсальным решением для многоцветной микроскопии.

96-луночные глубоколуночные планшеты (deep well) для станций очистки и выделения НК из различных типов биологического материала. Могут использоваться как для пробоподготовки на станциях методом магнитной сепарации, так и для последующего хранения проб. Данные планшеты имеют квадратные лунки и рекомендуются к использованию вместе с соответствующими гребенками наконечников для магнитов.

Характеристики планшета

• Материал — полипропилен (ПП);
• количество лунок — 96;
• объем, мл — 2,2;
• дно лунок — V-образное;
• форма лунок — квадратная;
• буквенно-цифровая разметка;
• срезанный угол A-1 — для правильного размещения планшета в приборе;
• совместимость — станции Auto-Pure 96 (Allsheng), Freedom EVO (TECAN), KingFisher Flex (Thermo FS);
• размеры (Д×Ш×В), мм — 127×85×44,4.

• Типы покрытия: необработанная, культуральная, BD BioCoat, BD PureCoat;
• типы: круглые, специальные с легким захватом Easy-Grip, с нанесенной сеткой;
• диаметр чашек, мм - 35, 60, 100 и 150.

Применяется для фильтрации в фармацевтической и биотехнологической промышленности.

• Материал мембран — дюрапор;
• максимальное давление, бар — 5,5;
• площадь фильтрации, см² — 50;
• диаметр пор — 0,1; 0,22; 0,45; 0,65 мкм.

• Сохраняет высокую выживаемость клеток;
• не влияет на поверхностные рецепторы клеток.

Наконечник для колонки продлевает срок службы Ваших колонок.

Характеристики наконечника

• Внутренний диаметр колонки, мм — 10;
• регулируемая торцевая крышка — наличие.

Наконечник для колонки продлевает срок службы ваших колонок.

Характеристики наконечника

• Внутренний диаметр колонки, мм — 6,6;
• регулируемая торцевая крышка — наличие.

Хроматографические колонки Omnifit EZ имеют возможность регулировать длину колонки.

Особенности колонки

• Боросиликатное стекло;
• равномерное распределение потока внутри колонки;
• подходит для многократного использования;
• подходит для загрузки любых сорбентов;
• комплект поставки: трубка 0,5 метров ПТФЭ (1/16 дюйма), трубка 2 метра ПТФЭ (1/16 дюйма), ПП фитинг ¼-28 UNF, комплект фритт (2 фриты ПЭ 10 мкм, 2 фриты ПТФЭ 10 мкм, 2 фриты ПТФЭ 30 мкм), фитинг конического порта Click-N-Seal 10-32.

Глубоколуночные планшеты для работы на станциях выделения НК моделей популярных моделей KingFisher производителя Thermo FS, могут использоваться для хранения реагентов.

Характеристики глубоколуночных планшетов

• Материал — полипропилен
• количество лунок, шт. — 96;
• форма дна — V-образное;
• совместимость с KingFisher — Flex, Duo Prime, Presto.

Пленка для ПЦР планшетов алюминиевая от производителя Sovtech предназначена для планшетов при транспортировке и долгого хранения образцов при низких температурах.

Характеристики пленки

• Материал — алюминий;
• температура использования, °С — от -40 до +120;
• температура запайки, °С — от +170 до +190;
• размер, мм — 125×80;
• толщина, мкм — 100;
• непрокалываемая;
• устойчивость к растворителям, включая ДМСО;
• влагонепроницаемая;
• сертифицирована на отсутствие ДНКаз, РНКаз, человеческой ДНК и ингибиторов ПЦР;
• пленка работает только при наличии термозапайщика.

Пленка для ПЦР планшетов алюминиевая от производителя Sovtech предназначена для планшетов при транспортировке и долгого хранения образцов при низких температурах.

Характеристики пленки

• Материал — алюминий;
• температура использования, °С — от -40 до +120;
• температура запайки, °С — от +170 до +190;
• размер — 78 мм × 300 м;
• толщина, мкм — 100;
• непрокалываемая;
• для термического запаивания глубоколуночных планшетов (Deep-well) 100 мкм;
  
• устойчивость к растворителям, включая ДМСО;
• влагонепроницаемая;
• сертифицирована на отсутствие ДНКаз, РНКаз, человеческой ДНК и ингибиторов ПЦР;
• пленка работает только при наличии термозапайщика.

• Объем помещений, м³ — от 0,20 до 10;
• расход дезинфектанта, мл/ч — 300;
• объем резервуара для дезинфектанта, мл — 250;
• регулировка угла наклона рабочей части;
• возможность задания циклов дезинфекции;
• время работы от батареи, ч — 2,5;
• габариты, Ш х Г х В, мм — 280 х 255 х 226;
• масса, кг — 7.

Станция выделения НК, белков и клеток из практически любого образца: крови, лизатов, клеток, фекалий, почвы, растительных клеток. Самая популярная, высокопроизводительная станция из семейства станций KingFisher-KingFisher Flex. Большой выбор комплектаций под разные задачи и протоколы, возможность работы с большими объемами образца (до 5 мл), а также с ПЦР плашками. Для крупных медицинских учреждений и научных лабораторий с большим потоком образцов.

Технические характеристики станции KingFisher Flex

• Автоматизированная;
• наличие стандартных протоколов, возможность добавления протоколов пользователем;
• наличие интерфейса RS232;
• производительность — 24 образца;
• объем образца, мкл — от 50 до 5000;
• возможность работы с 24 луночными планшетами с лунками разной формы и глубины;
• функция нагрева до 100 °С;
• 100 протоколов;
• большой ж/к дисплей с подсветкой;
• может быть дополнена автоматическим манипулятором;
• габариты, Ш×Г×В, мм — 680×600×380;
• масса нетто, кг — 28.

Преимущества станций KingFisher Flex:

• автоматизация рутинных стадий выделения и очистки;
• функция нагрева, возможность проведения лизиса с помощью станции;
• отсутствие перекрестной контаминации образцов;
• мощные магниты, позволяют полностью забрать образец из лунки;
• протокол процесса виден на мониторе станции или в программном обеспечении на компьютере.

Станции выделения НК, белков и отдельных клеток KingFisher Apex работает на основе технологии магнитной сепарации клеток. KingFisher Apex подходят для сложных протоколов выделения, требующих дозирования разных объемов и разного приемного пластика. Возможно работать как с плашками, так и с пробирками, а наличие сканнера штрих-кодов позволит отслеживать партию пластика.

Новые возможности от Apex:

• расширенные форматы пластика, возможность элюции в том числе в пробирках;
• возможность установки сразу двух голов, станция сама определит нужную к использованию в зависимости от протокола;
• большой touch screen дисплей с простым меню;
• работа с маленькими объемами образца;
• контроль нагрева и охлаждения с помощью встроенного блока нагрева/охлаждения;
• обучающая программа SmartStart для легкого запуска станции и протокола в первый раз;
• сканнер штрих-кодов для дальнейшего занесения номера партии планшет в протокол.

Технические данные станции Apex:

• автоматизированная;
• рабочие объемы, мкл:
  • от 15 до 200 (стандартная 96-канальная голова);
  • от 15 до 1000 (глубоколуночная 96-канальная голова);
  • от 20 до 80 (ПЦР-плашка);
  • от 30 до 5000 (24-луночная голова);
  • от 30 до 200 (96 пробирок по 0,5 мл с баркодом);
  • от 200 до 1000 (24 пробирки с баркодом);
• очистка 24-96 образцов за 25-65 минут;
• две встроенных УФ-лампа для деконтаминации;
• встроенное программное обеспечение;
• возможность докупить ПО Bendix для установки на компьютер;
• сканер штрих кодов для загрузки информации об образце и пластике в программное обеспечение;
• встроенная память для записи протоколов на 30 Гбайт;
• возможность загрузить готовы протоколы из библиотеки или записать пользовательские;
• возможность связи с облачным сервером для загрузки новых протоколов;
• габариты, Ш×Г×В, мм — 780×590×450;
• масса нетто, кг — 56.

• Типы покрытия: необработанная, культуральная, BD BioCoat, BD PureCoat;
• типы: круглые, специальные с легким захватом Easy-Grip, с нанесенной сеткой;
• диаметр чашек, мм - 35, 60, 100 и 150.

Lum V500 — люминесцентный тринокулярный инвертированный микроскоп. Модель в базовой комплектации обеспечивает работу в режимах светлого поля, фазового контраста и люминесценции. Возможна дополнительная комплектация камерой, монитором. В V500L источниками света выступают светодиоды, в V500 — ртутная и галогенная лампы. За счет разницы в источниках света модель V500L является узкополосным люминесцентным микроскопом, V500 — широкополосным люминесцентным микроскопом.

Общие характеристики и особенности MAGUS V500

• Увеличение, крат. — 100 – 400;
• методы исследования: ЛЮМ, СП, ФК;
• объективы планахроматы:
  • PLL 10×, NA 0,25
  • PLL 20×, NA 0,40;
  • PLL 40×, NA 0,60 (пружинящая оправа);
• объективы фазовые:
  • PLL 10×, NA 0,25 PHP2;
  • PLL 20×, NA 0,40 PHP2;
  • PLL 40×, NA 0,60 PHP2;
• количество гнезд в револьвере, шт — 6;
• окуляры — 10×/22;
• предметный столик, мм — 227×208;
• NA конденсора — 0,6;
• центрирующий микроскоп фазово-контрастного блока — наличие;
• настройка по по Кёлеру — наличие.
• освещение Lum V500:
  • проходящий свет: галогенная лампа 12 В/30 Вт (регулировка яркости);
  • отраженный свет: ртутная лампа 100 Вт.
• Освещение Lum V500L:
  • проходящий и отраженные свет: светодиоды 5 Вт.

Фильтры возбуждения люминесценции микроскопа MAGUS Lum V500

Фильтры люминесценции микроскопа MAGUS Lum V500L

Опции:

• окуляр 10х/22 мм со шкалой (арт. 82915),
• окуляр 12,5х/14 мм (арт. 82916),
• окуляр 12,5х/14 мм с диоптрийной коррекцией (арт. 82917),
• окуляр 15х/15 мм (арт. 82918),
• окуляр 20х/12 мм (арт. 82919),
• окуляр 20х/12 мм с диоптрийной коррекцией (арт. 82920),
• окуляр 25х/9 мм (арт. 82921),
• объектив 4х/0,10 Plan ∞/0,17 (арт. 83712).

Набор реагентов TSAPLus предназначен для двойной иммунофлуоресцентной окраски (IF488+ Red IF555) парафиновых срезов, в частности для двойной флуоресцентной иммуноразметки первичных антител из одного источника, а также для иммуноразметки антител из разных источников.

Основной принцип состоит в технологии усиления сигнала тирамида (TSA, Tyramide Signal Amplification). Принцип TSA заключается в применении пероксидазной реакции тирамида (флуоресцентно меченая соль тирамида образует ковалентную связь с участками связывания под действием HRP-катализированного пероксидом водорода (H₂O₂)), что приводит к множественным ферментативным реакциям. Продукт связывается с окружающими белковыми остатками (в том числе триптофан, гистидин и тирозин), формируя большое количество флуоресцентных отложений в месте связывания антигена с антителом, что способствует усилению сигнала.

Множественное флуоресцентное окрашивание также возможно за счёт повторной иммуноразметки с использованием различных флуоресцентных тирамидаз.

Если сравнивать с другими флуоресцентными наборами двойного окрашивания TSA, данный набор заменяет FITC-Tyramide и CY3-Tyramide на iF488-Tyramide и iF555-Tyramide, обеспечивая сильнее и стабильнее флуоресцентные сигналы.

Данные спектра флуоресценции соответствующих флуоресцентных красителей в наборах TSA

Условия хранения и транспортировки

Каждый компонент набора хранится при рекомендуемых условиях. Комплект транспортируется на влажном льду. Срок годности — 1 год.

Состав набора

Подготовка к эксперименту

• Приготовить 0,01 М фосфатно-солевой буфер (PBS) (рН 7,0-7,4), 3% H₂O₂ и 0,3% H₂O₂.
• Приготовить первичные антитела и соответствующие HRP-меченные вторичные антитела, а также раствор для восстановления антигена (выбрать подходящий в зависимости от типа ткани и антитела).
• В соответствии с таблицей ниже приготовить рабочий раствор TSA для окрашивания.

• После размораживания флуоресцентного тирамида пробирку кратковременно центрифугируют, затем тщательно перемешивают.
• Раствор TSA готовится непосредственно перед использованием, хранится в тёмном месте при 4 °С и остаётся эффективным в течение 24 часов.
  

Экспериментальный протокол (пример для тканевых срезов)

• Обезвоживание и гидратация срезов.
• Реставрация антигена: в зависимости от используемого первичного антитела и типа ткани выбирают подходящий метод.
• Промывка PBS: 3 раза по 5 минут, затем нанесение защитной маркировки (используйте гидрофобный маркер для иммуногистохимии Pap Pen).
• Блокирование эндогенной пероксидазы: покрыть ткани 3% H₂O₂, инкубировать 25 минут в темноте при комнатной температуре. Промыть PBS 3 раза по 5 минут.
• Блокирование неспецифического связывания: нанести 3% BSA или сыворотку на 30 минут.
• Инкубация с первичным антителом: развести антитело в PBS, инкубировать в увлажнённой камере при 4 градусах на ночь. Промыть PBS 3 раза по 5 минут.
• Инкубация с HRP-меченным вторичным антителом: развести в PBS, инкубировать 50 минут при комнатной температуре. Промыть PBS 3 раза по 5 минут.
• Окрашивание TSA-488: нанести 50-100 мкл раствора, инкубировать 10 минут в темноте. Промыть PBS 3 раза по 5 минут.
• Тепловая обработка в микроволновке: помещают срезы в буфер восстановления антигена, нагревают до 95 градусов на 15 минут.
• Повторная инкубация со вторым первичным антителом: аналогично шагу 6.
• Повторная инкубация с HRP-меченным вторичным антителом: аналогично шагу 7.
• Окрашивание TSA-555: аналогично шагу 8.
• Окрашивание ядра DAPI: инкубация 10 минут в темноте, промывка PBS.
• Гашение аутофлуоресценции (опционально): обработка судановым черным (Sudan Black B) 5 минут, промывка проточной водой 3 минуты.
• Закрепление и микроскопия: нанести антифлуоресцентный гаситель, запечатать срез, наблюдать под флуоресцентным или конфокальным микроскопом.

Примечания

• По сравнению с флуоресцентными вторичными антителами, набор TSA обеспечивает высокую чувствительность и мощный сигнал, поэтому концентрацию первичного антитела следует уменьшить в 5-10 раз по сравнению с обычными рекомендациями.
• При сильном фоновом свечении добавить этап гашения аутофлуоресценции.
• Рекомендуемое разведение флуоресцентного тирамида — 1:500 (можно варьировать от 1:200 до 1:1000).
• При множественной флуоресцентной окраске сначала инкубируют поликлональное антитело, затем моноклональное. Также сначала обрабатывают высокоэкспрессируемые белки, затем низкоэкспрессируемые.

LumiMount Plus — это готовая к применению монтажная среда на водной основе, предназначенная для фиксации и последующей микроскопии флуоресцентно меченых клеточных и тканевых образцов. Благодаря повышенной вязкости состав легко наносится пипеткой, равномерно распределяется под покровным стеклом и минимизирует образование воздушных пузырей, что особенно важно при подготовке высококачественных микропрепаратов.

Основное преимущество данной среды — это способность эффективно подавлять фотобелинг флуорохромов и флуоресцентных белков, что значительно увеличивает временной интервал для проведения микроскопии и документирования результатов. После нанесения среда постепенно теряет влагу, затвердевает и формирует прозрачную матрицу с коэффициентом преломления 1,52, близким к стеклу, что улучшает оптическое разрешение при наблюдении.

Характеристики среды

• Объём, мл — 15;
• основа — водная;
• консистенция — вязкая;
• коэффициент преломления (до высыхания) — 1,43;
• коэффициент преломления (после полимеризации) — 1,52;
• тип герметизации — полупостоянная;
• условия хранения препарата после монтирования, °С — от +2 до +8;
• совместимость — не рекомендуется для использования с интеркалирующими ядерными красителями (DAPI, Hoechst и аналогами).

Препараты могут храниться в течение нескольких недель или месяцев при температуре от +2 до +8 °С в темноте. При необходимости покровное стекло можно аккуратно снять — для этого достаточно погрузить слайд в буферный раствор (например, PBS) до полного растворения среды.

Важно отметить, что состав LumiMount Plus не совместим с ДНК-интеркалирующими красителями, такими как DAPI и Hoechst, поскольку может нарушать их связывание с ядерной ДНК или снижать интенсивность флуоресценции. Поэтому для ядерного окрашивания рекомендуется использовать альтернативные монтажные среды, специально разработанные для работы с этими красителями.

Набор предназначен для многоцветного иммуногистохимического флуоресцентного окрашивания парафиновых срезов, особенно для иммуноокрашивания первичных антител из одного источника.

Принцип работы набора основан на технологии усиления сигнала тирамида (TSA). В процессе каталитической активности HRP (хреновой пероксидазы) флуоресцентно-меченный тирамин также катализируется, его продукты связываются с белковыми остатками (триптофан, гистидин, тирозин) в области связывания антигена и антитела, что усиливает сигнал.

Этот набор использует флуоресцентные красители 488/555/647 для мечения тирамида. Полученные флуоресцентные молекулы обеспечивают стабильный и яркий сигнал, что позволяет проводить повторное иммуномечение для многократного флуоресцентного окрашивания.

Флуоресцентный спектр используемых красителей

Условия хранения и транспортировки

Каждый компонент набора хранится при рекомендуемых условиях. Комплект транспортируется на влажном льду. Срок годности — 1 год.

Состав набора

Подготовка к эксперименту

• Приготовьте 0,01 моль/л PBS (pH 7,0-7,4) (рекомендуется G4202 или G0002), 3% H₂O₂ и 0,3% H₂O₂.
• Подготовьте первичные антитела, соответствующие HRP-меченные вторичные антитела и раствор для восстановления антигена (подбирается в зависимости от антитела и типа ткани).
• Подготовьте рабочие растворы TSA в соответствии с таблицей:

Примечание: перед использованием центрифугируйте флуоресцентный тирамид. Готовый рабочий раствор храните при 4 градусах в темноте, использовать в течение 24 часов.

Применение

• Подготовка образца: депарафинизация и регидратация тканевого среза стандартным методом IHC.
• (Опционально) Восстановление антигена: обработка ткани в растворе для восстановления антигена, затем промывка PBS (3×5 мин).
• Ограждение области ткани: используйте гидрофобный маркер для иммуногистохимии Pap Pen.
• (Опционально) Гашение аутоглюоресценции: нанесение 100 мкл раствора A на 30 мин, затем промывка.
• Блокирование эндогенной пероксидазы: 3% H₂O₂ на 25 мин в темноте.
• Блокирование неспецифического связывания: 100-150 мкл 3% BSA или сыворотки на 30 мин.
• Окрашивание 1-м флуорофором (488)
• Инкубация с первичным антителом (4 градуса, в темноте).
• Промывка PBS (3×5 мин).
• Инкубация с HRP-меченным вторичным антителом (50 мин, комнатная температура).
• Промывка PBS (3×5 мин).
• Инкубация с TSA-488 (10 мин в темноте), затем промывка.
• Тепловая обработка: удаление антител и повторное окрашивание вторым антителом.
• Окрашивание 2-м флуорофором (555): повторение шага 7 с TSA-555.
• Окрашивание 3-м флуорофором (647): повторение шага 7 с TSA-647.
• Контрастное окрашивание ядер: 100-150 мкл DAPI (10 мин, в темноте).
• Промывка PBS (3×5 мин).
• (Опционально) Повторное гашение аутоглюоресценции: обработка раствором B (30 мин), затем промывка.
• Анализ: монтирование покровного стекла с антифлуоресцентным агентом и визуализация на микроскопе.

Примечания

• Последовательность окрашивания (488, 555, 647) можно менять.
• Оптимизируйте условия эксперимента для максимальной специфичности сигнала.
• Возможные проблемы и их решения:

Счетчик клеток С100 позволяет быстро проводить подсчет клеток, определять их жизнеспособность, размер, определять эффективность трансфекции и флуоресценции клеток.

Характеристики счетчика клеток С100

• Диапазон измерений размера клеток, мкм — 4–60;
• рекомендованный диапазон измерений размера клеток, мкм — 7–60;
• диапазон концентрации, клеток/мл — 1×10⁴ —1×10⁷;
• минимальный объем образца, мкл —10;
• время обработки, сек — не более 9;
• встроенное ПО;
• интерфейс USB;
• внутренняя память на 1000 измерений;
• оптика — светлое поле;
• камера, МП — 5;
• оптическое увеличение, х — 2,5;
• автофокус;
• сенсорный экран;
• счет в светлом поле;
• анализ флуоресценции клеток;
• счет по трипановому синему;
• габариты, Ш × Г × В, см — 21,2 × 16,5 × 26,4;
• вес, кг — 3,2.

Комплект поставки: счетчик клеток, 50 шт. одноразовых слайдов.

Аксессуары и опции: одноразовый слайд, куб флуоресцентный AO/GFP, куб флуоресцентный DAPI, куб флуоресцентный PI.

Счетчик клеток С100-Pro позволяет быстро проводить подсчет клеток, определять их жизнеспособность, размер, определять эффективность трансфекции и флуоресценции клеток. Cчетчик клеток С100-Pro исполнен в соответствии с требованиями части 11 главы 21 Свода Федеральных Документов CFR, выпускаемого организацией Food and Drug Administration (США), с целью соответствия всех электронных данных определенным требованиям, с тем чтобы обеспечить полное документирование всех процессов и защиту от манипуляций.

Характеристики счетчика клеток С100-Pro

• Диапазон измерений размера клеток, мкм — 4–60;
• рекомендованный диапазон измерений размера клеток, мкм — 7–60;
• диапазон концентрации, клеток/мл — 1×10⁴ –1×10⁷;
• минимальный объем образца, мкл —10;
• время обработки, сек — не более 9;
• встроенное ПО;
• интерфейс USB;
• внутренняя память на 1000 измерений;
• оптика — светлое поле;
• камера, МП — 5;
• оптическое увеличение, х — 2,5;
• автофокус;
• сенсорный экран;
• счет в светлом поле;
• анализ флуоресценции клеток;
• счет по трипановому синему;
• габариты, Ш× Г×В, см — 21,2×16,5×26,4;
• вес, кг — 3,5.

Комплект поставки: счетчик клеток, 50 шт. одноразовых слайдов.

Аксессуары и опции: одноразовый слайд, куб флуоресцентный AO/GFP, куб флуоресцентный DAPI, куб флуоресцентный PI.

Проточный цитометр Attune CytPix для широкого спектра задач – компактный, простой, удобный в использовании.

С помощью изображений полученных Attune CytPix можно оценит морфологию клеток, отслеживать контаминацию, показать межклеточные взаимодействия, морфологические характеристики апоптотических клеток и убедиться, что через луч лазера проходит отдельная клетка, а не конгломераты, их обломки или мусор, а так же можно просматривать и группировать изображения.

Уникальные особенности проточного цитометра Attune CytPix

• Возможность протокола анализа без лизиса и отмывок для минимизации потери клеток, и экономии время, а также упрощение подготовки;
• снижение времени пробоподготовки на 65%;
• характеристика клеточных популяций;
• стабильное качество изображения при высокой скорости потока;
• описание морфологии апоптотических клеток;
• исследование межклеточных взаимодействий;
• контроль качества клеточных культур, отслеживание контаминации;
• просмотр и группировка изображений, а также определение типов клеток;
• визуализация для подтверждения и настройки гейта, включая только отдельные клетки, представляющие интерес;
• система очистки, которая механически уменьшает возникновение засорения.

Протоколы подготовки образцов.

Примеры использования проточного цитометр Attune CytPix

Рисунок 1. Ядра эритроцитов курицы (CEN) склонны слипаться в дублеты или другие агрегаты. Стратегия гейтирования слипшихся ядер эритроцитов курицы с Attune CytPix.

Рисунок 2. С помощью проточного цитометра Attune CytPix можно просматривать и группировать изображения, а также определять типы клеток E. coli на основе их морфологических характеристик. В течении роста клетки E. coli, развиваются в два типа колониеобразующих клеток - короткие, которые напоминают отдельные клетки, и удлиненные структуры.

Рисунок 3. Отслеживание контаминации критически важно для анализа клеточных линий. На пример, перед трансплантацией клеток Вы можете их проверить на контаминацию с помощью Attune CytPix.

Рисунок 4. Визуализация Attune CytPix показывает межклеточные взаимодействия на примере CAR T-клеток, нацеленных на клетки лимфомы.

Рисунок 5. Анализ апоптоза клеток (с использованием аннексина V и PI) дополняется изображениями с выявленным морфологическим особенностями каждой клетки. Морфологические характеристики апоптотических клеточных популяции, полученные проточным цитометром Attune CytPix.

Особые преимущества проточного цитометра с визуализацией Attune CytPix

• Программное обеспечение и камера проточного цитометра Attune CytPix гарантируют, что события, которые анализируются, являются отдельными клетками, а не дублетами, скоплениями, обломками клеток или мусором.
• Акустическая фокусировка в 10 раз быстрее любой другой в проточном цитометре Attune CytPix.

Гидродинамическая фокусировка обеспечивает точное позиционирование клеток по центральной оси, позволяя клеткам быть сосредоточенными на точку лазерного луча и совместно с высокоскоростной камерой обеспечивает качественную картинку (Рисунок 6).

Проточный цитометр Attune CytPix с высокоскоростной камерой имеет большое значение для исследования в области клеточной биологии, генной терапии и оптимизации их протоколов.

Рисунок 6. Акустическая фокусировка в сравнении с традиционной гидродинамической фокусировкой.

Рисунок 7. Стабильное качество изображения при высокой скорости потока 12,5 мик/мин, 25 мик/мин, 100 мик/мин, 200 мик/мин, 500 мик/мин и 1000 мик/мин. Нет изменений в частоте визуализации и получению картин. Простая настройка фокуса и камеры для получения качественного изображения.

Технические характеристики проточного цитометра Attune CytPix

• Количество лазеров – 2/4;
• каналы детекции – канал прямого и бокового светорассеяния и 14 флуоресцентных каналов;
• освещение изображения – 405 нм лазер с менее 50 наносекундный импульс;
• акустическая фокусировка;
• чувствительность – ≤80 MESF for FITC, ≤30 MESF for PE, ≤70 MESF for APC;
• скорость анализа, событий/сек – более 35 тыс.;
• скорость фотографии, фото/сек – 6000;
• кратность увеличения – 20×;
• разрешение камеры, нм/Мп – 0,3;
• размер частиц, нм – до 800;
• статус использования – только для исследований;
• программное обеспечение – Invitrogen Attune 21 CFR Part 11;
• процессор – Nvidia Quadro P2200 GPU;
• жесткий диск – 2 x 8TB SSD, 2,5-inch Samsung 870 QVO, 560 MB/s;
• габариты, В × Ш × Г, см – 49 × 58 × 43.

Опции: автоподатчик Invitrogen CytKick Autosampler и робот подачи планшетов Orbitor RS2 Microplate Mover увеличат операционную мощность, уменьшат количество ошибок, связанных с человеческим фактором.

Рисунок 8. Дополнительные конфигурации увеличивают операционную мощность, уменьшают количество ошибок, связанных с человеческим фактором.
(A) Attune CytPix Flow Cytometer
(B) Invitrogen CytKick Autosampler
(C) Orbitor RS2 Microplate Mover

Таблица 1. Сравнение автосэмплеров Invitrogen CytKick и CytKick Max

Характеристика	Автосэмплер CytKick	Автосэмплер CytKick Max
Пропускная способность	42 мин для 96-луночного планшета в высокопропускном режиме	22 мин для 96-луночного планшета (в ускоренном режиме с одной промывкой, одного смешивания и полного анализа образца 20 мкл)
Совместимость	96-луночные глубоколуночные планшеты 96-луночные стандартные планшеты 384-луночные глубоколуночные планшеты 384-луночные стандартные планшеты	96-луночные глубоколуночные планшеты 96-луночные стандартные планшеты 384-луночные глубоколуночные планшеты 384-луночные стандартные планшеты 1,5 и 2 мл микроцентрифужные пробирки в шативе (до 24 мест) 96-луночные планшеты, запечатанные фольгой 384-луночные планшеты, запечатанные фольгой, дополнительные типы планшет

Таблица 2. Конфигурации цитометра Attune CytPix.

* - Число каналов детекции включает все каналы флюоресценции, а также каналы прямого и бокового рассеяния.

Таблица 3. Конфигурация лазеров, количество каналов детекции в сравнении Attune CytPix с Attune NxT

* - Число каналов детекции включает все каналы флюоресценции, а также каналы прямого и бокового рассеяния.

Выбрать можно конфигурацию прибора, соответствующую вашим потребности. Проточный цитометр Attune CytPix доступен в конфигурациях с 2–4 лазерами с визуализацией в светлом поле, а проточный цитометр Attun NxT доступен с 1–4 лазерами без визуализации.

Таблица 4. Выбор красителей для определения жизнеспособности клеток